Électrophorèse sur gel de polyacrylamide
L'électrophorèse sur gel est une technique fondamentale dans les laboratoires des disciplines biologiques, permettant la séparation de macromolécules telles que l'ADN, l'ARN et les protéines.Différents supports et mécanismes de séparation permettent de séparer plus efficacement des sous-ensembles de ces molécules en exploitant leurs caractéristiques physiques.Pour les protéines en particulier, l’électrophorèse sur gel de Polyacrylamide (PAGE) est souvent la technique de choix.
La PAGE est une technique qui sépare les macromolécules telles que les protéines en fonction de leur mobilité électrophorétique, c'est-à-dire la capacité des analytes à se déplacer vers une électrode de charge opposée.En PAGE, cela est déterminé par la charge, la taille (poids moléculaire) et la forme de la molécule.Les analytes se déplacent à travers les pores formés dans le gel de polyacrylamide.Contrairement à l’ADN et à l’ARN, la charge des protéines varie en fonction des acides aminés incorporés, ce qui peut influencer leur fonctionnement.Les chaînes d'acides aminés peuvent également former des structures secondaires qui ont un impact sur leur taille apparente et, par conséquent, sur leur capacité à se déplacer à travers les pores.Il peut donc parfois être souhaitable de dénaturer les protéines avant l'électrophorèse pour les linéariser si une estimation plus précise de leur taille est requise.
PAGE FDS
L'électrophorèse sur gel de polyacrylamide au dodécylsulfate de sodium est une technique utilisée pour séparer des molécules protéiques de masses de 5 à 250 kDa.Les protéines sont séparées uniquement sur la base de leur poids moléculaire.Le dodécylsulfate de sodium, un tensioactif anionique, est ajouté dans la préparation de gels qui masque les charges intrinsèques des échantillons de protéines et leur confère un rapport charge/masse similaire.En termes simples, cela dénature les protéines et leur donne une charge négative.
PAGE native
Native PAGE est une technique qui utilise des gels non dénaturés pour la séparation des protéines.Contrairement au SDS PAGE, aucun agent dénaturant n’est ajouté dans la préparation des gels.En conséquence, la séparation des protéines s’effectue sur la base de la charge et de la taille des protéines.Dans cette technique, la conformation, le repliement et les chaînes d’acides aminés des protéines sont les facteurs dont dépend la séparation.Les protéines ne sont pas endommagées au cours de ce processus et peuvent être récupérées une fois la séparation terminée.
Comment fonctionne l’électrophorèse sur gel de polyacrylamide (PAGE) ?
Le principe de base du PAGE est de séparer les analytes en les faisant passer à travers les pores d'un gel de polyacrylamide à l'aide d'un courant électrique.Pour y parvenir, un mélange acrylamide-bisacrylamide est polymérisé (polyacrylamide) par ajout de persulfate d'ammonium (APS).La réaction, qui est catalysée par la tétraméthyléthylènediamine (TEMED), forme une structure en forme de filet avec des pores à travers lesquels les analytes peuvent se déplacer (Figure 2).Plus le pourcentage d’acrylamide total inclus dans le gel est élevé, plus la taille des pores est petite, donc plus les protéines qui pourront passer à travers sont petites.Le rapport acrylamide/bisacrylamide aura également un impact sur la taille des pores, mais celui-ci reste souvent constant.Des pores plus petits réduisent également la vitesse à laquelle les petites protéines peuvent se déplacer à travers le gel, améliorant ainsi leur résolution et les empêchant de s'écouler rapidement dans le tampon lorsqu'un courant est appliqué.
Équipement pour l'électrophorèse sur gel de polyacrylamide
Cellule d'électrophorèse sur gel (réservoir/chambre)
Le réservoir de gel pour électrophorèse sur gel de polyacrylamide (PAGE) est différent du réservoir de gel d'agarose.Le réservoir de gel d'agarose est horizontal, tandis que le réservoir PAGE est vertical.Par cellule d'électrophorèse verticale (réservoir/chambre), un gel fin (normalement 1,0 mm ou 1,5 mm) est versé entre deux plaques de verre et monté de manière à ce que le bas du gel soit immergé dans le tampon d'une chambre et le haut soit immergé dans le tampon. dans une autre chambre.Lorsqu'un courant est appliqué, une petite quantité de tampon migre à travers le gel de la chambre supérieure vers la chambre inférieure.Doté de pinces solides pour garantir que l'assemblage reste en position verticale, l'équipement facilite des passages rapides du gel avec un refroidissement uniforme résultant en des bandes distinctes.
Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) fabrique une gamme de tailles de cellules d'électrophorèse sur gel de polyacrylamide (réservoirs/chambres).Les modèles DYCZ-20C et DYCZ-20G sont des cellules d'électrophorèse verticales (réservoirs/chambres) pour l'analyse par séquençage de l'ADN.Certaines cellules d'électrophorèse verticales (réservoirs/chambres) sont compatibles avec le système de transfert, comme les modèles DYCZ-24DN, DYCZ-25D et DYCZ-25E sont compatibles avec le système de transfert Western modèle DYCZ-40D, DYCZ-40G et DYCZ-40F, qui sont utilisés pour transférer la molécule protéique du gel à la membrane.Après électrophorèse SDS-PAGE, le Western Blot est une technique permettant de détecter une protéine spécifique dans un mélange de protéines.Vous pouvez choisir ces systèmes de transfert en fonction des exigences expérimentales.
Alimentation pour électrophorèse
Pour fournir l’électricité nécessaire au fonctionnement du gel, vous aurez besoin d’une alimentation électrique pour électrophorèse.Chez Liuyi Biotechnology, nous proposons une gamme d'alimentations pour électrophorèse pour toutes les applications.Les modèles DYY-12 et DYY-12C avec une tension et un courant stables élevés peuvent répondre aux exigences d'électrophorèse à haute tension.Il a la fonction de support, de synchronisation, de VH et d'application étape par étape.Ils sont idéaux pour les applications d’électrophorèse IEF et de séquençage d’ADN.Pour les applications générales d'électrophorèse de protéines et d'ADN, nous avons les modèles DYY-2C, DYY-6C, DYY-10, etc., qui sont également des alimentations en vente chaude avec des cellules d'électrophorèse (réservoirs/chambres).Ceux-ci peuvent être utilisés pour les applications d’électrophorèse moyenne et basse tension, telles que les laboratoires scolaires, les laboratoires hospitaliers, etc.Pour plus de modèles d'alimentation, veuillez visiter notre site Web.
La marque Liuyi a plus de 50 ans d'histoire en Chine et l'entreprise peut fournir des produits stables et de haute qualité partout dans le monde.Grâce à des années de développement, il mérite votre choix !
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Références pour Qu'est-ce que l'électrophorèse sur gel de polyacrylamide ?
1. Karen Steward PhD Électrophorèse sur gel de polyacrylamide, comment cela fonctionne, variantes techniques et ses applications
Heure de publication : 23 mai 2022