L'électrophorèse sur gel d'ADN est une technique de biologie moléculaire courante utilisée pour séparer et analyser des fragments d'ADN en fonction de leur taille.Le processus consiste à charger des fragments d'ADN de différentes tailles sur un gel d'agarose, un glucide présent dans les algues rouges.
Préparation et coulée du gel d'agarose
- Dissoudre l'agarose dans une quantité appropriée de tampon d'électrophorèse.La concentration du gel est déterminée par le rapport masse/volume, par exemple 1 g d'agarose dans 100ml de tampon pour un gel à 1%.
- Chauffer le mélange au micro-ondes en faisant tourner le récipient pour assurer une dissolution complète de l'agarose.
- Ajouter du bromure d'éthidium à la solution de gel jusqu'à une concentration finale de 0,5mg/ ml.Le bromure d'éthidium s'intercale entre les paires de bases d'ADN adjacentes et émet une fluorescence orange sous la lumière UV.Notez que le bromure d'éthidium est cancérigène, sa manipulation nécessite donc des mesures de sécurité appropriées, comme le port de gants.
- Refroidissez la solution de gel dans un bain-marie pour éviter que le plateau de gel ne se déforme en raison des températures élevées.
- Placez un peigne dans la solution de gel pour former des puits d'échantillon.Sélectionnez des peignes adaptés à la quantité d’échantillon d’ADN que vous allez charger.Versez la solution de gel d'agarose dans leplateau de gelet laissez-le se solidifier à température ambiante.
- Une fois le gel solidifié, retirez le peigne.Si vous n'utilisez pas le gel immédiatement, enveloppez-le dans une pellicule plastique et conservez-le à 4 ℃ jusqu'à ce que vous en ayez besoin.
Préparation et exécution du gel
Avant de commencer l'électrophorèse, mélangez l'échantillon d'ADN avec le tampon de chargement.Le tampon de chargement est généralement six fois plus concentré et aide l’échantillon à couler au fond des puits et à suivre le mouvement pendant l’électrophorèse.
Réglez l'alimentation sur la tension spécifiée.
Ajoutez suffisamment de tampon d'électrophorèse dans le réservoir de gel pour couvrir la surface du gel.Assurerles connexions correctes des électrodes.
Chargez l'échantillon d'ADN et les marqueurs de poids moléculaire dans les puits de gel.
Allumez l’alimentation électrique pour lancer l’électrophorèse.
Observation de fragments d'ADN séparés
Après l'électrophorèse, coupez l'alimentation électrique et retirez le gel.
Utilisez une source de lumière UV pour éclairer le gel ;Les fragments d'ADN apparaîtront sous forme de bandes fluorescentes orange.
Documentez l’image du gel pour analyser les fragments d’ADN séparés.
Après l’expérience, assurez-vous d’éliminer correctement le gel et le tampon d’électrophorèse, en suivant les directives du laboratoire.Portez toujours des gants lorsque vous manipulez des gels et des tampons contenant du bromure d'éthidium pour vous protéger contre l'exposition à cette substance dangereuse.
L'électrophorèse sur gel d'ADN est largement utilisée dans la recherche en biologie moléculaire et en génétique pour estimer la taille des molécules d'ADN, séparer les fragments d'ADN, détecter les mutations génétiques et prendre les empreintes génétiques, entre autres applications.Il s’agit d’une technique expérimentale simple et efficace qui aide à comprendre la composition et les caractéristiques des échantillons d’ADN.
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Heure de publication : 08 août 2023