L'électrophorèse sur gel est l'une des principales méthodes utilisées en biologie moléculaire pour l'analyse de l'ADN.Cette méthode implique la migration de fragments d’ADN à travers un gel, où ils sont séparés en fonction de leur taille ou de leur forme.Cependant, avez-vous déjà rencontré des erreurs lors de vos expériences d'électrophorèse, telles que des bandes étalées sur le gel d'agarose, ou l'absence de bandes sur le gel ?Quelle pourrait être la cause de ces erreurs ?
Nos techniciens ont résumé ici quelques dépannages pour votre référence.
1. Bandes étalées sur gel d'agarose
●L'ADN était dégradé.Évitez la contamination par les nucléases.
● Le tampon d'électrophorèse n'est pas frais.Après une utilisation répétée du tampon d'électrophorèse, la force ionique diminue et sa valeur de pH augmente, de sorte que la capacité tampon s'affaiblit, ce qui affecte l'effet d'électrophorèse.Il est recommandé de remplacer fréquemment le tampon d'électrophorèse.
● Des conditions d'électrophorèse inappropriées ont été utilisées.Ne laissez pas la tension dépasser 20 V/cm et maintenez une température <30 °C pendant l'électrophorèse.Pour l’électrophorèse des brins d’ADN géants, la température doit être <15°C. Vérifiez que le tampon d’électrophorèse a une capacité tampon suffisante.
● Trop d'ADN a été chargé sur le gel.Diminuez la quantité d’ADN.
● Trop de sel dans l'ADN.Utilisez la précipitation à l'éthanol pour éliminer les excès de sels à l'avance.
● L'ADN a été contaminé par des protéines.Utilisez des extractions au phénol pour éliminer les protéines de manière avancée.
● L'ADN a été dénaturé.Ne pas chauffer avant l'électrophorèse.Diluer l'ADN dans un tampon avec 20 mM de NaCl.
2. Anomalies migration de la bande d'ADN
● Renaturation du site COS du fragment λHind III.Chauffer l'ADN pendant 5 minutes à 65°C avant l'électrophorèse, puis le refroidir sur un appareil de glace pendant 5 minutes.
● Des conditions d'électrophorèse inappropriées ont été utilisées.Ne laissez pas la tension dépasser 20 V/cm et maintenez une température <30 °C pendant l'électrophorèse.Vérifiez que le tampon d'électrophorèse a une capacité tampon suffisante.
● L'ADN a été dénaturé.Ne pas chauffer avant l'électrophorèse.Diluer l'ADN dans un tampon avec 20 mM de NaCl.
3. Bandes d'ADN faibles ou inexistantes sur le gel d'agarose
● La quantité ou la concentration d'ADN chargé sur le gel était insuffisante.Augmentez la quantité d'ADN.L'électrophorèse sur gel de polyacrylamide est légèrement plus sensible que l'électrophorèse sur agarose et la charge de l'échantillon peut être réduite de manière appropriée.
● L'ADN a été dégradé.Évitez la contamination par les nucléases.
● L'ADN a été soumis à une électrophorèse du gel.Électrophorèsez le gel pendant moins de temps, utilisez une tension plus faible ou utilisez un pourcentage de gel plus élevé.
● Une source de lumière W inappropriée a été utilisée pour la visualisation de l'ADN coloré au bromure d'éthidium.Utilisez une lumière W de longueur d’onde courte (254 nm) pour une plus grande sensibilité.
4. Bandes d'ADN manquantes
●L'ADN de petite taille a été extrait du gel par électrophorèse.Électrophorèsez le gel pendant moins de temps, utilisez une tension plus faible ou utilisez un pourcentage de gel plus élevé.
● Difficile de distinguer les bandes d'ADN de molécules similaires.Augmentez le temps d'électrophorèse et vérifiez la concentrationdu gel pour vous assurer que le pourcentage de gel à utiliser est correct.
● L'ADN a été dénaturé.Ne pas chauffer avant l'électrophorèse.Diluer l'ADN dans un tampon avec 20 mM de NaCl.
● Les brins d'ADN sont énormes et l'électrophorèse sur gel conventionnelle n'est pas adaptée.Analyser sur électrophorèse pulsée sur gel.Quels autres problèmes avez-vous rencontrés avec l’électrophorèse sur gel d’agarose ?Nous rechercherons davantage de guides à l’avenir.
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Heure de publication : 09 mai 2022