Avez-vous des difficultés à préparer du gel d’agarose ?Faisons un suivi avecnotre technicien de laboratoire dans la préparation du gel.
Le processus de préparation du gel d’agarose comprend les étapes suivantes :
Pesée de la poudre d'agarose
Pesez la quantité requise de poudre d'agarose en fonction de la concentration souhaitée pour votre expérience. Les concentrations courantes d'agarose varient de 0,5 % à 3 %. Des concentrations plus élevées sont utilisées pour séparer les molécules d’ADN plus petites, tandis que des concentrations plus faibles sont utilisées pour les molécules plus grosses.
Préparation de la solution tampon
Ajouter la poudre d'agarose à un tampon d'électrophorèse approprié, tel que 1 × TAE ou 1 × TBE. Le volume de tampon doit correspondre au volume de gel nécessaire à votre expérience.
Dissoudre l'agarose
Chauffer le mélange d’agarose et de tampon jusqu’à ce que l’agarose se dissolve complètement. Cela peut être fait à l'aide d'un micro-ondes ou d'une plaque chauffante. Remuez la solution par intermittence pour éviter qu'elle ne déborde. La solution d'agarose doit devenir claire sans aucune particule visible.
Refroidir la solution d'agarose
Laisser la solution d’agarose chauffée refroidir à environ 50-60°C. Remuez la solution pendant le processus de refroidissement pour éviter une solidification prématurée.
Ajout d'une teinture d'acide nucléique (facultatif)
Si vous souhaitez visualiser l'ADN ou l'ARN dans le gel, vous pouvez ajouter à ce stade une coloration d'acide nucléique, telle que GelRed ou bromure d'éthidium. Lorsque vous manipulez ces taches, portez des gants et soyez prudent, car elles peuvent être toxiques.
Couler le gel
Versez la solution d’agarose refroidie dans un moule de gel d’électrophorèse préparé. Insérez un peigne pour créer des puits d'échantillon, en vous assurant que le peigne est bien fixé et que la solution est uniformément répartie dans le moule.
Solidification du gel
Laissez le gel se solidifier à température ambiante, ce qui prend généralement 20 à 30 minutes selon la concentration et l'épaisseur du gel.
Rretirer le peigne
Une fois le gel complètement solidifié, retirez délicatement le peigne pour révéler les puits d’échantillon. Placez le gel avec le moule dans la chambre d'électrophorèse et recouvrez-le de la quantité appropriée de tampon d'électrophorèse, en vous assurant que le gel est complètement immergé.
Préparation à l'électrophorèse
Une fois le gel prêt, chargez vos échantillons dans les puits et procédez à l'expérience d'électrophorèse..
Si vous rencontrez des problèmes avec la préparation du gel, n'hésitez pas à nous contacter. Nous avons des techniciens de laboratoire professionnels disponibles pour communiquer avec vous.
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Heure de publication : 15 octobre 2024