Introduction
L'électrophorèse sur gel est une technique fondamentale en biologie moléculaire, largement utilisée pour la séparation des protéines, des acides nucléiques et d'autres macromolécules. Un contrôle approprié du volume de l'échantillon, de la tension et de la durée de l'électrophorèse est crucial pour obtenir des résultats précis et reproductibles.Notre collègue de laboratoire vous proposemeilleures pratiques pour gérer ces paramètres lors de l’électrophorèse sur gel SDS-PAGE.
Produits d'électrophorèse sur gel de biotechnologie Beijing Liuyi
Volume d'échantillon : garantir la cohérence
Lors de la réalisation d’une électrophorèse SDS-PAGE, le volume de l’échantillon est un facteur clé qui peut avoir un impact significatif sur la résolution de vos résultats. Il est généralement recommandé de charger 10 µL de protéines totales par puits. Pour garantir la cohérence et empêcher la diffusion des échantillons entre les puits adjacents, il est important de charger un volume égal de tampon de chargement 1x dans tous les puits vides. Cette précaution permet d'éviter la propagation des échantillons dans les couloirs voisins, ce qui peut se produire si le puits est laissé vide.
Avant de charger vos échantillons, commencez toujours par ajouter un marqueur de poids moléculaire dans un puits. Cela permet une identification facile de la taille des protéines après électrophorèse.
Contrôle de tension : équilibrer la vitesse et la résolution
La tension appliquée pendant l'électrophorèse affecte directement à la fois la vitesse à laquelle les échantillons migrent à travers le gel et la résolution de la séparation. Pour le SDS-PAGE, il est conseillé de démarrer avec une basse tension de l'ordre de 80V. Cette basse tension initiale permet aux échantillons de migrer lentement et uniformément, en les concentrant dans une bande nette lorsqu'ils entrent dans le gel de séparation.
Une fois que les échantillons ont entièrement pénétré dans le gel séparateur, la tension peut être augmentée jusqu'à 120 V. Cette tension plus élevée accélère la migration, garantissant que les protéines sont efficacement séparées en fonction de leur poids moléculaire. Il est essentiel de surveiller l’évolution du front colorant bleu de bromophénol, qui indique la fin de l’électrophorèse. Pour les gels avec une concentration de 10 à 12 %, 80 à 90 minutes suffisent généralement ; cependant, pour les gels à 15 %, vous devrez peut-être prolonger légèrement la durée d’exécution.
Gestion du temps : savoir quand s'arrêter
Le timing est un autre facteur critique dans l’électrophorèse sur gel. Faire fonctionner le gel pendant une période trop longue ou trop courte peut conduire à une séparation sous-optimale. La migration du colorant bleu de bromophénol est un indicateur utile : lorsqu’il atteint le fond du gel, il est généralement temps d’arrêter l’analyse. Pour les gels standards, tels que 10 à 12 %, une durée d'électrophorèse d'environ 80 à 90 minutes est généralement adéquate. Pour les gels à pourcentage plus élevé, comme 15 %, le temps d’exécution doit être prolongé pour garantir une séparation complète des protéines.
Gestion des tampons : réutilisation et préparation des tampons
Le tampon d'électrophorèse peut être réutilisé 1 à 2 fois, selon les conditions spécifiques de votre laboratoire. Cependant, pour des résultats optimaux, il est recommandé de préparer un nouveau tampon 10x et de le diluer juste avant utilisation. Cela garantit que le tampon conserve son efficacité, conduisant à des résultats d'électrophorèse plus fiables.
Produits d'électrophorèse sur gel de biotechnologie Beijing Liuyi
En contrôlant soigneusement le volume de l'échantillon, la tension et la durée de l'électrophorèse, vous pouvez améliorer considérablement la précision et la reproductibilité de vos résultats d'électrophorèse sur gel. La mise en œuvre de ces bonnes pratiques dans votre travail en laboratoire vous aidera à obtenir des bandes plus claires et plus distinctes, conduisant à de meilleures données pour l'analyse en aval.
Si vous disposez d'autres bonnes méthodes pour optimiser l'expérience d'électrophorèse sur gel, n'hésitez pas à en discuter avec nous !
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) est spécialisée dans la fabrication d'instruments d'électrophorèse depuis plus de 50 ans avec notre propre équipe technique professionnelle et notre propre centre de R&D. Nous disposons d'une ligne de production fiable et complète de la conception à l'inspection, en passant par l'entrepôt, ainsi qu'un support marketing. Nos principaux produits sont la cellule d'électrophorèse (réservoir/chambre), l'alimentation électrique d'électrophorèse, le transilluminateur à LED bleue, le transilluminateur UV, le système d'image et d'analyse de gel, etc. Nous fournissons également les instruments de laboratoire comme l'instrument PCR, le mélangeur vortex et la centrifugeuse pour laboratoire.
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Heure de publication : 20 août 2024