Principe
L'électrophorèse sur film d'acétate de cellulose est une méthode d'électrophorèse utilisant un film d'acétate de cellulose comme support. Le phénomène dans lequel les particules chargées se déplacent vers l’électrode opposée sous l’action d’un champ électrique est appelé électrophorèse. Puisque chaque protéine a un point isoélectrique spécifique, si une protéine est placée dans une solution dont le pH est inférieur à son point isoélectrique, la protéine sera chargée positivement et se déplacera vers l’électrode négative. Au contraire, il se déplace vers le pôle positif. Étant donné que la vitesse des molécules de protéines se déplaçant dans un champ électrique est liée à leur charge, à la forme et à la taille des molécules, différentes protéines peuvent être séparées par électrophorèse. Le sérum contient une variété de protéines, qui ont toutes un point isoélectrique à pH 7,5 ou moins. Lorsque le sérum est placé dans un tampon pH 8,6 pour effectuer une électrophorèse, toutes les protéines sériques sont chargées négativement et se déplacent vers le côté positif du champ électrique. Étant donné que diverses protéines sériques ont des charges différentes au même pH, les particules moléculaires sont de taille différente et donc la vitesse de migration est différente et elles sont séparées par électrophorèse. Les points isoélectriques et les poids moléculaires des protéines sériques sont indiqués dans le tableau ci-dessous :
| Protéine | Points isoélectriques (PI) | Poids moléculaire |
| Albumine | 4,88 | 69 000 |
| α1-glouline | 5h00 | 200 000 |
| α2-glouline | 5.06 | 300 000 |
| β-glouline | 5.12 | 9 000~150 000 |
| γ-glouline | 6,85~7,50 | 156 000~ 300 000 |
L'expérience consiste à séparer différentes protéines du sérum sanguin avec une membrane d'acétate de cellulose (abréviation CAM) comme support. CAM est une sorte de toilettes en mousseefilm avec un bon uniforme et l'épaisseur est de 0,1 mm à 1,5 mm, ce qui a une certaine absorption d'eau.
Matériels, instruments et réactifs pour l'électrophorèse CAM
Échantillons :sérum sanguin humain sain
Instrument:alimentation DYY-6C, réservoir d'électrophorèse DYCP-38C, chargement d'échantillon supérieur WD-9404
Les réactifs
1) membrane d'acétate de cellulose 7X9cm
2) Solution tampon barbitol PH 8,6 (force ionique 0,05-0,09, temps 0,06 tid.) : prendre 1,84 g d'acide diéthylbarbiturique, puis prendre 1,03 g de pentobarbital diéthylsodique, ajouter un peu d'eau distillée pour chauffer pour dissoudre et faire jusqu'à 1000 ml ;
3) Tache: Ponceau S 0,2 g, Trichloroacétique 3 g, ajouter 100 ml d'eau distillée ;
4) TBS/T ou PBS/T : 45 ml d'éthanol à 95 %, 5 ml d'acide acétique glacial, ajouter 50 ml d'eau distillée ;
5) Solution de nettoyage : 70 ml d'éthanol anhydre, 30 ml d'acide acétique glacial.
Méthode d'expérimentationd
1) Préparez la membrane : Plongez la membrane dans la solution tampon barbitol 30min-8h, et retirez-la, retirez l'excédent de solution par du papier absorbant.
2) Chargement des échantillons : Distinguez le côté rugueux du côté lisse de la membrane et tracez une ligne à 1,5 cm de l'extrémité supérieure du côté rugueux. Chargez les échantillons à l'aide d'un outil de chargement d'échantillons supérieur sur le côté rugueux. Remarque : Les échantillons doivent être chargés sur le côté rugueux de la membrane. Une fois que les échantillons de sérum ont complètement pénétré dans la membrane, retournez la membrane, placez le côté rugueux (avec les échantillons) face vers le réservoir et l'extrémité avec les échantillons est placée dans l'électrode négative.
3) Électrophorèse : Allumez l’alimentation électrique, 0,4～Membrane de 0,6 m A/cm, la durée de fonctionnement est de 30 à 45 min. Après avoir exécuté l’électrophorèse, coupez l’alimentation.
4) Tache et nettoyage : retirez la membrane du réservoir et plongez-lait dans la solution de colorant pendant 5 minutes, puis nettoyez-le encore et encore dans la solution de nettoyage 3 à 4 fois jusqu'à ce que la couleur de fond soit claire. Les protéines sériques doivent être indiquées sur les bandes, et normalement il y a cinq zones, depuis l'extrémité supérieure de la ligne marquée, Albumine, α1-glouline, α2-glouline, β-glouline, γ-glouline.
5) Conservation : mettre l'électrophorèse à secgroupedans une solution de nettoyage pendant 10 à 15 minutes, puis retirez-le et collez-le sur un verre propre. Une fois sec, il deviendra un film transparentgroupe.
ExpérienceRésultat
L'effet de séparation des échantillons de sérum est bon et il n'y a pas de phénomène de queue de bande. La répétabilité des résultats varie en raison des procédures de test et des méthodes de l'expérimentateur, et la répétabilité est élevée.
Conclusion
Le système de détection rapide par électrophorèse clinique (Cuve d'électrophorèseDYCP-38C,alimentationDYY-6C et chargement d'échantillons supérieur WD-9404) produit par notreSociété Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdrépond aux exigences expérimentales,etles résultats sont reproductibles, simples et rapides, adaptés àenseignementrecherche.
Pékin LiuyiBiotechnology Co., Ltd se spécialise dans la fabrication de produits d'électrophorèse pour l'industrie des sciences de la vie, quia plus de 50 ans d'histoire en Chine et l'entreprise peut fournir des produits stables et de haute qualité partout dans le monde. Grâce à des années de développement, il mérite votre choix !
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Heure de publication : 14 novembre 2022